（一）实验目的

将新鲜组织标本制成薄而连续的石蜡切片，为HE染色、免疫组化等后续病理检测提供优质样本，便于显微镜下观察组织形态结构及病理变化。

（二）实验材料

1.  样本：新鲜动物组织或人体穿刺/手术标本；2.  试剂：4%多聚甲醛固定液、梯度酒精（70%、80%、90%、95%、无水乙醇）、二甲苯、石蜡（熔点56-58℃）、苏木素-伊红染液（备用）；3.  仪器：病理组织脱水机、包埋机、切片机、摊片机、烤片机、显微镜、镊子、剪刀、组织包埋盒、载玻片、盖玻片。

（三）实验步骤

1. 组织固定：取新鲜组织，用剪刀修剪成1-2cm×1-2cm×0.3cm大小（避免过厚导致固定不充分），迅速放入4%多聚甲醛固定液中，固定时间4-24小时（组织越大，固定时间越长，一般不超过24小时，防止组织过度硬化）。固定的目的是保持组织细胞的形态结构，阻止细胞自溶和腐败。

2. 组织脱水：将固定好的组织取出，用流水冲洗30分钟，去除残留固定液，然后依次放入梯度酒精中脱水，每步停留1-2小时（脱水需彻底，否则影响透明和包埋）：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精（2次，每次1小时）→无水乙醇（2次，每次1小时）。脱水原理是逐步去除组织内水分，为后续透明剂和石蜡渗透做准备。

3. 组织透明：将脱水后的组织放入二甲苯中透明，分2次进行，每次15-30分钟，直至组织完全透明（呈半透明状，无白色浑浊）。透明的作用是使石蜡能顺利渗透到组织内部，二甲苯可溶解乙醇，同时与石蜡互溶。

4. 组织包埋：提前将石蜡放入包埋机中融化（温度设置56-58℃，与石蜡熔点匹配），将透明后的组织放入融化的石蜡中浸泡，3次，每次1小时，完成石蜡渗透。然后将组织放入包埋盒，调整组织位置（切面朝下，便于后续切片），倒入融化的石蜡，待石蜡冷却凝固后，形成石蜡块，取出备用。

5. 切片：将石蜡块固定在切片机上，调整切片厚度为4-5μm，转动切片机制作连续切片。用毛笔将切片轻轻取下，放入40-45℃的摊片机中，使切片展平（避免褶皱），然后用载玻片将展平的切片捞起，置于烤片机上（60℃）烘烤2-4小时，使切片牢固粘附在载玻片上，同时去除残留二甲苯和水分。

6. 备用：烤片完成后，取出载玻片，冷却至室温，可直接进行染色，或置于干燥处保存，避免受潮。

（四）注意事项

1.  固定液需足量，组织与固定液体积比不低于1:10，且组织修剪厚度不超过0.3cm，确保固定均匀透彻，避免中心部位细胞自溶；

2.  脱水、透明、石蜡渗透需严格遵循梯度流程，不可跳过或缩短某一步骤，否则易导致组织碎裂、透明不全，最终影响切片完整性；

3.  包埋时需调整组织切面朝下，石蜡温度稳定在熔点范围，避免温度过高损伤组织、过低导致渗透不足；切片及捞片过程动作轻柔，防止切片褶皱、断裂，烤片后需置于干燥环境保存，避免受潮影响后续染色。

文章出自：病理检测外包      想了解更多请关注：https://www.vv-gene.com/