（一）实验目的

通过苏木素（碱性染料）和伊红（酸性染料）对组织切片进行染色，使细胞核、细胞质呈现不同颜色，清晰显示组织细胞的形态结构、排列方式，为病理诊断提供基础依据。

（二）实验材料

1.  样本：已烤好的病理石蜡切片；2.  试剂：苏木素染液、伊红染液、1%盐酸酒精分化液、自来水（返蓝用）、梯度酒精（70%、80%、90%、95%、无水乙醇）、二甲苯、中性树胶；3.  仪器：染色架、染色缸、显微镜、镊子、盖玻片、吸水纸。

（三）实验步骤

1. 脱蜡至水：将切片放入二甲苯中脱蜡，2次，每次10分钟；然后依次放入无水乙醇→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精，每步5分钟，最后用自来水冲洗5分钟，完成脱蜡至水（脱蜡不彻底会导致染色不均）。

2. 苏木素染色：将切片放入苏木素染液中，染色5-10分钟（根据染液浓度和切片厚度调整时间，避免染色过深或过浅），取出后用自来水冲洗，去除残留染液。

3. 分化：将切片放入1%盐酸酒精分化液中，浸泡3-5秒（快速分化，期间观察切片颜色，直至切片呈淡红色），立即用自来水冲洗，终止分化。分化的目的是去除细胞核周围多余的染液，使细胞核染色清晰。

4. 返蓝：将分化后的切片放入自来水中浸泡10-15分钟，使细胞核恢复蓝色（自来水呈弱碱性，可中和盐酸，使苏木素显色更稳定），也可放入淡氨水（0.5%）中30秒加速返蓝，再用自来水冲洗。

5. 伊红染色：将切片放入伊红染液中，染色2-3分钟（细胞质染色，颜色呈粉红色即可），取出后用自来水冲洗，去除残留染液。

6. 脱水透明：依次将切片放入70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→无水乙醇（2次），每步3-5分钟，脱水；然后放入二甲苯（2次），每次5分钟，透明。

7. 封片：取出透明后的切片，在切片中央滴加1-2滴中性树胶，用盖玻片轻轻覆盖（避免产生气泡，气泡会影响观察），用吸水纸吸去多余树胶，置于通风处晾干，或60℃烤片10分钟加速干燥。

8. 观察：将封好的切片放在显微镜下，低倍镜（10×）找到观察区域，再用高倍镜（40×）观察，细胞核呈蓝色，细胞质呈粉红色，记录组织形态。

（四）注意事项

1.  分化是核心步骤，需在显微镜下实时观察，待切片呈淡红色即刻终止，时间过长致细胞核褪色、过短则染色过深，可提前用废切片练习掌握节奏；

2.  脱水透明需彻底，每步梯度酒精及二甲苯浸泡时间足额，若残留水分或乙醇，封片后会出现云雾状模糊，影响观察效果；

3.  封片时中性树胶用量以刚好覆盖组织为宜，滴加后轻轻覆上盖玻片，从一侧缓慢压合避免产生气泡，多余树胶用吸水纸轻柔拭去，防止污染切片。

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