💡实验室新人必码！做免疫组化/荧光总翻车？ 可能是你的OCT包埋没到位！ ✅OCT包埋的原理 💡支撑与保护作用 OCT是一种水溶性高分子化合物（主要含聚乙烯醇、聚乙二醇等），在低温下凝固后能为组织提供物理支撑，防止切片时组织碎裂。 💡减少冰晶形成 OCT的高渗透性可置换组织中的水分，配合快速冷冻（如液氮或干冰），减少冰晶生成，从而保护细胞超微结构。 💡便于切片操作 凝固后的OCT形成均匀基质，使切片刀更容易切出连续、完整的薄片（通常4-10 μm）。 💡兼容性 OCT可溶于水，切片后易被PBS或缓冲液洗去，不影响后续染色（如HE、免疫组化、荧光标记等）。 ✅OCT包埋的注意事项 💡组织处理 - 新鲜组织：取材后需立即冷冻，避免组织自溶或降解（尤其是RNA/DNA易降解的研究）。 - 预冷处理：将OCT和模具预冷（如-20℃），防止包埋时组织变形。 - 方向调整：将目标切面朝下放置于OCT中，确保切片方向正确。 💡冷冻过程 - 快速冷冻： - 小组织块可直接浸入液氮或预冷的异戊烷（-80℃）中速冻，避免冰晶形成。 - 大组织可先置于OCT中，再放入-80℃冰箱梯度冷冻。 - 避免气泡：包埋时确保OCT完全覆盖组织，避免气泡残留影响切片完整性。 💡OCT使用技巧 - 适量OCT：过多会导致切片时打滑，过少则支撑不足，需完全包裹组织。 - 分层包埋：对脆弱组织可分层滴加OCT，增强支撑性。 - 标记信息：在模具边缘标记样本编号（避免使用易脱落标签）。 💡储存与切片 - 长期保存：包埋后的组织块需密封保存于-80℃，避免反复冻融。 - 切片温度：切片机温度通常设为-20℃至-25℃，组织温度过低易碎，过高易融化。 - 防污染：切片刀和载玻片需清洁，避免OCT残留影响染色。 💡特殊样本处理 - 脂肪或骨组织：需延长冷冻时间或使用特殊包埋方法。 - 细胞涂片/悬浮细胞：可离心成团后与OCT混合包埋。 --- 🌟🌟🌟常见问题与解决 - 切片碎裂：提高切片温度（如-18℃），或检查刀片锋利度。 - 组织脱落：载玻片可预先涂覆多聚赖氨酸或防脱片剂。 - 冰晶空洞：确保快速冷冻，或使用蔗糖梯度脱水预处理。