免疫荧光染色

1、用PBS轻洗组织载玻片两次，切记轻缓，防止切片从载玻片上脱落，必要时静泡去除OCT胶即可；

2、固定：加入4%PFA固定20min；

3、破膜：0.3% TritonX-100/PBS 破膜30min；

4、封闭：加入blocking buffer ,置于室温下1h；

5、一抗孵育：加入一抗，在4度孵育过夜或在室温孵育3h；用PBS轻缓清洗一抗 3 次，10min/次；

6、二抗孵育：加入二抗，室温孵育1h；用PBS轻缓清洗二抗3 次，10min/次；

7、DAPI 染色：加入DAPI溶液，室温5min；用PBS清洗DAPI 3 次，10min/次；

8、封片：在载玻片上滴加封闭液，覆上盖玻片，注意赶走气泡，用指甲油封片；

9、荧光显微镜下拍片。

H & E 染色

1. 准备：将生理盐水湿润的纱布放置在培养皿上，培养皿放置在冰上；

2. 取材：快速取下肌肉标本，将其放置在纱布上；

3. 标本处理：将肌肉标本浸入经液氮预冷的异戊烷内30-60s，处理后的肌肉标本放入液氮中保存；

4. 冻切片：肌肉标本切片厚度10um，将其贴在载玻片上，-20℃保存；

（注意：实验过程中避免肌肉标本冻融）

5.苏木素染1 min（染液回收）——水洗；

6.1%伊红染1 min（染液回收）——水洗；

7.80%酒精——90%酒精——100%酒精——100%酒精—— 二甲苯

8.树胶封片。

尼氏染色

1、冰冻切片一定要在室温下干燥至少1小时，否则在后续步骤中容易脱片；

2、slice置于双蒸水中，静置2min;

3、slice浸入nissl染液中，于37度孵育30min，切片越厚，孵育时间宜延长；

4、染液孵育结束后，蒸馏水浸洗2次，每次数秒；

5、将slice依次浸入95%乙醇2 次，2min/次，二甲苯中透明2 次，5 min/次；

6、中性树胶封片。

注意：千万不要等到二甲苯干了再封片，否则，组织会变成棕黑色；未干情况下封片还可帮助稀释中性树胶，减少气泡。

文章出自：肥大细胞染色实验     想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/