一、贴壁细胞的TUNEL染色

取待测的细胞爬片，用新鲜配制的×1PBS清

洗，室温，3分钟×3

用4%多聚甲醛固定，室温，25分钟。

用新鲜配制的×1PBS清洗，室温，5分钟×2次。

细胞爬片浸入0.2%TritonX-100(×1 PBS配制）溶液中，室温，5分钟。

浸入新鲜配制的×1PBS中清洗，室温，5分钟× 2次。

移去细胞爬片上多余的液体，滴加

equilibration buffer，每张片子100ul，室温孵育5~10分钟。

配rTdT反应液，每张细胞片100 ul

(equilibration buffer 98 μI+biotinylated

nucleotide mix 1 μl+rTdT enzyme 1ul)。

移去细胞爬片上多余的液体，每张细胞片滴加

100 μlrTdT反应液（避免细胞片变干），放人湿盒中，37℃，60分钟。

用去离子水稀释× 20 SSC至×2SSC

(1:10)，倾去rTdT反应液，滴加×2SSC,室

温，15分钟，终止反应。

浸入×1PBS（新鲜配制）中清洗，去除未结合的生物素化的核苷酸，室温，5分钟×3次。

浸入0.3%H202，溶液中，室温，3~5分钟，阻断内源性过氧化物酶的作用。

浸入×1PBS（新鲜配制）中清洗，室温，5分钟×3次。

用×1PBS稀释streptavidin HRP

(1:500)，每张细胞片加100ul，室温孵育，30分钟。

浸入×1 PBS（新鲜配制）中清洗，室温，5分钟×3次。

配制DAB使用液(50 μl20×DAB substrate

buffer+950μl去离子水+50 ul 20×DAB

chromogen+50ul × 20 H202)，避光，滴加100μlDAB使用液至细胞片，显色，直到浅棕褐色背景出现，避免背景颜色过深。

去离子水清洗数次，脱水，透明，封片，镜下观察。

文章出自：TUNEL    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/