一、石蜡切片

1️⃣烤片

将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上，将其放入55℃的恒温箱中烤片30分钟；同时将脱蜡液1缸一起放入55℃的恒温箱中；

2️⃣脱蜡至水

将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温，5分钟后，将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中，并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、无水乙醇3也可以选择梯度浓度乙醇的顺序依次将石蜡切片放入缸中，每缸5分钟；用流水清洗切片5分钟；

3️⃣抗原修复

在高压锅中，加入抗原修复液，高火预热；待修复液沸腾后将切片置于其中，并完全浸泡组织，盖好锅盖，扣上压力阀，高火继续加热；

待限压阀开始转动喷气后调至中火，同时开始计时2分钟；计时结束后离开热源，自然降压后将高压锅移入冷水中缓慢冷却。待修复液温度降至室温后，用缓冲液PBS洗涤3次，每次1min。

6大技巧总结及注意事项

✅流水清洗时水流不能直接对着切片；

✅操作过程中需一直保持切片处于湿润状态；

✅修复液需完全浸没切片上组织；

✅修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序；

✅修复完成后避免快速冷却；

✅修复液可根据实验需求自行选用修复液。

二、冰冻切片

1️⃣样本在OCT包埋液中进行速冻（OCT的配方针对Optimal Cutting Temperature进行了优化）；

2️⃣冰冻块固定在组织卡盘（chuck）中，并固定在切片组件上；

3️⃣切片厚度为10-20μm，逐片收集；

4️⃣擦去多余的OCT，用组化笔勾画组织的疏水边界。

注意事项

✅切片晾干10-15min，以防止切片在后续洗涤步骤中脱片。

文章出自：免疫荧光组织切片实验      想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/