病理组织石蜡包埋和切片是病理学中常用的技术，用于制备组织样本以供显微镜下观察以下是步骤及注意事项:

石蜡包埋步骤

1.取材和固定:

取材:从病变部位切取适量组织。固定:将组织放入 10%的中性缓冲甲醛溶液中固定12-24 小时，防止组.织腐败和自溶。

2.脱水:

将固定好的组织依次放入不同浓度的乙醇溶液(70%、80%、90%、95%.

100%)中，每级脱水 30 分钟到1小时。

3.透明:

将脱水后的组织放入二甲苯或甲苯中，透明化处理，使组织中的水分和乙醇完全被替代。

4浸蜡:

将透明后的组织放入液态石蜡中，浸泡 2-3次，每次 30 分钟到1小时石蜡温度应保持在 56-60℃。

5.包埋:

往包埋盒中加少许蜡液，将浸蜡后的组织放入石蜡包埋盒中间位置，确保组织最大面或者指定处面向包埋盒底部并浸没在蜡液中，用融化的石蜡浇铸并使其冷却凝固，形成石蜡块。

切片步骤

1.修块:

将石蜡块边缘多余的石蜡修掉，确保切片表面平整。

2.切片:

使用石蜡切片机将石蜡块切成 3-5 微米厚的薄片。

3.展片

将切好的薄片放在 40-45℃的温水中展平，然后将其捞出，贴在载玻片上。

4.烤片:

将载玻片放入60℃的烤箱中烤片30分钟至1小时，使切片充分粘附在载玻片上并去除多余水分。

注意事项

固定时间:固定液可以稳定细胞内的蛋白质和其他生物大分子，防止它们在处理、储存或观察过程中发生降解或变形，应当确保固定时间充分，防止组织自溶影响后续处理效果。

脱水和透明:每级处理时间应足够，避免组织中残留水分或乙醇，影响浸蜡效

果。

浸蜡温度:石蜡可以完全替代组织中的所有溶剂，可以进一步固定组织的形态保持石蜡温度恒定，防止温度过高导致组织过度收缩或变形。

切片厚度:切片厚度应均匀，过厚或过薄都可能影响显微镜下观察效果。

展片温度:水温过高会使蜡片融化，过低会导致蜡片皱缩，影响切片展平效果适宜的温度应保持在 40-45℃。

烤片时间:烤片时间应充分，确保切片牢固粘附在载玻片上。

个人防护:实验人员应全程佩戴口罩、手套，实验过程中避免被烫伤、割伤

1. 固定问题

问题:组织未完全固定，导致形态失真或细胞结构不清晰。

处理办法:

确保使用合适的固定液(如 10%的中性福尔马林)并遵循固定时间。

固定时间要足够长，通常 24 小时以上，具体时间视组织大小而定。

2.脱水问题

问题:组织脱水不完全或过度脱水，导致组织收缩或硬化。

处理办法:

使用逐步增浓的酒精系列(从 70%到 100%)进行脱水，每步脱水时间适中。

确保每个脱水步骤时间足够，但不过度延长，避免组织过度收缩。

3.透明化问题

问题:透明化不完全，组织在石蜡中无法充分浸润。

处理办法:

透明化时使用新鲜的二甲苯或替代品，确保组织透明彻底，

延长透明化时间，尤其是较大的组织块。

4.包埋问题

问题:包埋不良，石蜡块中有气泡或石蜡不均匀。

处理办法:

包埋前确保石蜡完全溶化，温度适中(约 60°C)。轻轻震动或使用真空设备去除气泡

5.切片问题

问题:切片破裂、皱折或厚薄不均。

处理办法:

确保切片刀锋利，切割角度合适

调整切片厚度(通常在 3-5 微米之间)以适应不同组织的需要。

切片前将石蜡块在冰上轻微冷冻，使组织更加坚硬。

6.染色问题

问题:染色不均或染色不充分，

处理办法:

确保染色液新鲜并按照标准操作程序进行染色，

对染色步骤进行时间控制，确保每步染色时间一致。

7.组织脱片

问题:组织从载玻片上脱落

处理办法:

载玻片进行适当处理，如涂覆黏附剂(如 APES 或明胶)。

确保组织贴附后充分干燥再进行后续处理。

文章出自：组织石蜡包埋和切片    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/