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扫描电镜(SEM)生物标本的制备是一个精细的过程,需要特别注意样品的形态保持、干燥和导电性。以下简介扫描电镜生物标本制备的一般操作:
1. 取材:选择适当的生物材料,如组织或细胞,并迅速将其切取。对于组织取材,切除组织要快,并迅速浸入预冷的固定液中,以防止细胞自溶。
2. 固定:使用适当的固定液,如2%-4%的戊二醛(glutaraldehyde),在4°C下固定1-2小时。戊二醛能较好地保存微细结构,但对组织抗原有一定影响。
3. 漂洗:用磷酸盐缓冲液(PBS)在4°C下漂洗0.4-2小时,中间需换液2次,以去除多余的固定液。
4. 脱水:使用一系列浓度递增的乙醇或丙酮溶液进行脱水,如50%、70%、80%、90% 至 100%,每次脱水15分钟至30分钟。
5. 临界点干燥:为了避免样品在干燥过程中发生形变,可以使用临界点干燥器进行干燥,这一步骤对于保持生物样品的原始形态至关重要。
6. 导电处理:由于扫描电镜需要在真空中进行观察,样品必须能够导电以避免电荷积累。可以使用金属胶带、喷金或镀铂等方法使样品表面导电。
7. 样品安装:将干燥和导电处理后的样品安装到SEM专用的样品托上。确保样品稳固,避免在高真空环境下样品移动或振动。
8. 观察:在SEM中进行观察前,可能需要对样品进行额外的处理,如喷金增加导电性,或使用冷台减少样品在观察过程中的荷电现象。
9. 显微镜操作:在SEM中,通过调节适当的参数,如加速电压、工作距离等,进行生物样品的成像。
制备过程中,样品的每个步骤都需小心操作,以保证最终成像的质量和准确性。此外,样品制备的具体细节可能会根据样品的类型和所需的特定信息有所不同。
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