1、概念：

荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，简称FISH）是一种基于核酸杂交原理的分子生物学技术，主要用于在细胞或组织中定位和检测特定的DNA或RNA序列。它使用荧光标记的探针，这些探针是与目标序列互补的核酸片段，通过杂交反应与目标序列结合，然后通过荧光显微镜观察和定位。

2、  实验设备：FISH实验需要的设备包括显微镜（最好是荧光显微镜）、恒温水浴或杂交炉（用于探针的杂交）、离心机（用于样品的处理和洗涤）、冷冻切片机（如果处理组织样品）等。此外，还需要各种实验耗材，如滑片、盖片、荧光标记的探针等。

3、实验步骤：

样品制备：首先，需要将细胞或组织样品制备到滑片上，并进行固定。如果是细胞样品，通常可以直接涂抹到滑片上；如果是组织样品，可能需要进行切片。固定的目的是保持细胞或组织的结构，并防止DNA或RNA的降解。

 DNA或RNA的变性：然后，需要通过加热或使用化学试剂将样品中的DNA或RNA变性，使其从双链状态变为单链状态，以便探针可以与其杂交。

探针杂交：接下来，将荧光标记的探针加入到样品中，让它与目标DNA或RNA序列进行杂交。这通常在恒温条件下进行，需要一定的时间。

 洗涤：杂交后，需要通过洗涤去除未结合的或非特异性结合的探针。

荧光显微镜观察和图像分析：最后，使用荧光显微镜观察样品，检测和定位荧光信号。然后进行图像分析，根据荧光信号的位置和强度，得出目标DNA或RNA序列在细胞或组织中的分布和表达水平。

4、  常见问题及解决方法：

 非特异性结合：如果探针与非目标序列发生结合，可能会产生假阳性的结果。这可以通过优化杂交条件（如温度、时间、探针浓度等）和使用更特异性的探针来减少。

信号强度低：信号强度低可能导致目标序列的检测不准确。这可能是因为探针的质量不好、探针的浓度不足、杂交条件不理想等原因。可以通过提高探针的质量和浓度、优化杂交条件、使用信号放大技术等方法来提高信号强度。

背景高：背景高可能使得真正的信号难以区分。这可能是由于非特异性结合、滑片的污染、荧光显微镜的设置不当等原因。可以通过减少非特异性结合、提高滑片的清洁度、优化显微镜的设置等方法来降低背景。

文章出自：荧光原位杂交实验（FISH）    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/