1⃣️石蜡包埋、切片、脱水；67°C，30min 烤干切片

2⃣️石蜡切片脱蜡至水；

3⃣️抗原修复
切片稍用于后用【免疫组化笔】在组织周围画圈(防止液体流走)，在圈内滴加【蛋白酶K工作液】覆盖组织，室温孵育20min，37C；将玻片置于PBS洗涤 5min，重复3次；

4⃣️切片稍甩干后在圈内滴加【破膜工作液 】
(20ul 110%柠檬酸钠+20ul10%Triton-X100+1980ul ddH2O)覆盖组织，常温下孵育 10min，将玻片置于【PBS】洗涤 5min，重复3

5⃣️加试剂 1、2
按片子数量和组织大小取 【tunel 试剂盒】内适量【试剂 1(TdT)】和【试剂 2(Lable solution)】按 1:9 混合，加到圈内覆盖组织，阴性对照仅加 50ul【试剂2 Lable solution】，切片平放于湿盒内，37°C水锅孵育60min，湿盒内加少量水保持湿度(试剂2有 FITC 标记可以直接在光显微镜下观察)；

6⃣️玻片置于【PBS】避光洗涤 5min，重复3次。切片稍甩干后在圈内滴加【DAPI工作液】50ul染液，室温避光孵育 5min；

7⃣️玻片置于【PBS 】避光洗涤 5min，重复3次。切片稍甩干后用抗荧光猝灭封片剂封片；

8⃣️切片于 Olympus 倒置荧光显微镜下观察并采集图像，分析。

文章出自：Tunel染色实验    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/