1 、取材固定：离心收集细胞或细菌沉淀，要求沉淀最少绿豆大小。去培养基加入电镜固定 液 4℃重悬混匀固定 2-4h ，4℃固定保存及运输。

2 、琼脂预包埋：细胞或细菌用离心机离心，弃上清加入 0. 1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4） ， 混匀漂洗 3min 后再离心，重复洗涤 3 次。提前加热溶解制备 1%琼脂糖溶液，稍冷却后加 入 EP 管内，在琼脂糖凝固之前将沉淀用镊子挑起悬浮包裹于琼脂糖内。

3 、后固定：0. 1M 磷酸缓冲液 PB（PH7.4）配制的 1%锇酸避光室温固定 2h 。0. 1M 磷酸缓 冲液 PB（PH7.4）漂洗 3 次，每次 15min。

4 、室温脱水：组织依次入 30%-50%-70%-80%-95%- 100%- 100%酒精上行脱水每次 20min， 100%丙酮两次，每次 15min。

5 、渗透包埋：丙酮︰812 包埋剂=1︰1 37℃ 2-4h ， 丙酮︰812 包埋剂=1︰2 37℃渗透过夜， 纯 812 包埋剂 37℃ 5-8h。将纯 812 包埋剂倒入包埋板，将样品插入包埋板后 37℃烤箱过夜。

6 、聚合：包埋板放于 60℃烤箱聚合 48h ，取出树脂块备用。

7 、超薄切片：树脂块于超薄切片机 60-80nm 超薄切片，150  目方华膜铜网捞片。

8 、染色：铜网于 2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色 8min；70%酒精清洗 3 次；超纯水清洗 3 次；2.6%枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色 8min；超纯水清洗 3 次，滤纸稍吸干。铜网切片放 入铜网盒内室温干燥过夜。

9 、透射电子显微镜下观察，采集图像分析。

文章出自：投射电镜实验    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/