染色原理

抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP) 是破骨细胞的特异性标志酶，酒石酸盐抵抗的酸性磷酸酶在酒石酸环境中,水解荼酚磷酸盐,产生的 a-蔡酚与重氮副品红偶联形成不溶性的紫红色沉淀。骨组织中的破骨细胞分泌酒石酸盐抵抗的酸性磷酸酶,用此方法可显示骨组织中破骨细胞的活性.此方法适用于骨组织的石蜡切片,冰冻切片及培养的破骨细胞。

染色步骤

1.37℃预热足够的去离子水，Fixation solution(固定液)室温放置，细胞爬片浸没30秒，用去离子水彻底清洗，不要让爬片太干燥；

2.PBS洗一次，吸弃时注意易将细胞吸掉；

3.准备两个1.5mLep管，各加Fastgarnet GBCBasesolution(快速石榴石型碱溶液)和Sodium Nitrite Solution(亚硝酸盐溶液)，轻轻沉匀30秒，室温静置2分钟。两者混合后为步骤三混匀的溶液；

4.另标签一个管为A(B)，并按以下要求配置混合液:(个人意见:明书的B不用做只是对照)混匀的溶液Naphthol AS-BI Phosphate Solution（蔡酚AS-BI 磷酸溶液) Acelate Solution (酷酸盐溶液)37℃预热的去离子水 Tartrate Solution《酒石酸盐溶液)(个人意见:最后加活石酸盐溶液避光)；

5.把步4中的配置的染色液倒入合适的染色缸中(个人意见:直接在35mm 皿上放置可拆卸96微孔板染，然后避光(锡箱纸包裹后放置于一次性手套)水浴)，水浴加热到37℃，再加玻片前一定要保证温度达到 37℃；

6.把爬片放入染色缸中，37℃避光孵育1小时；

7.孵育1小时后，用去离子水彻底清洗爬片；

8.在HematoxylinGll NO.3(苏木精洛液)复染2分钟；

9.碱性自来水冲洗儿分钟，直到出现蓝色的核；

10.自然晾干，甘油明胶封片，显微镜观察。

染色结果

破骨细胞细胞浆呈紫红色胞核蓝色。

注意事项

骨组织易脱片，操作过程水洗要轻。

文章出自：Trap染色实验    想了解更多请关注：http://www.vv-gene.com/