荧光DAPI染色

日期：2024-08-17 返回

一、实验原理 DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。 DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。

二、实验过程

1、用PBS按照1(原液)：5000(PBS)稀释DAPI原液

2、吸去细胞怕片上的细胞培养基，PBS清洗三次（不能让细胞干透）

3、用3.7%甲醛固定细胞10min

4、吸去固定剂，用PBS冲洗三次，每次5min

5、用0.2% Triton X-100使得细胞透化处理5min

6、吸去Triton，PBS清洗3次，每次5min

7、DAPI工作液室温下染色1-5min

8、吸去工作液，PBS清洗三次。

9、成像

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