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瑞氏-吉姆萨染色(Wright-Giemsa Staining)原理:
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合呈红色;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性蛋白质,与碱性染料美蓝或天青结合,呈紫蓝色;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,呈淡紫色。
吉姆萨染料由伊红,天青组成,染色原理与瑞氏染色法基本相同。
瑞氏染色法对细胞浆内的颗粒染色效果好,但对细胞核的染色不如吉姆萨染色法。吉姆萨染色法对细胞核着色好,但对胞浆颗粒着色较差,且有时对细胞核着色较深,核结构显示不佳。为兼顾二者之长,常用瑞氏-吉姆萨复合染色法。
用途和目的:常用于血液涂片、肺泡灌洗液涂片、骨髓细胞涂片、细菌、染色体、组织切片等的染色。标本染色后,相应各类细胞呈现不同的着色,从而达到辨别其形态特征的目的。
染色步骤:
1. 自来水流水缓慢冲洗晾干后的载玻片洗去载玻片上的杂质,注意流水从涂片上方流下,避免直接冲洗细胞;
2. 将载玻片晾干后置于瑞士染液中染色10min;
3. 尽量沥干载玻片,再置于吉姆萨染液中染色4min。染色完毕后流水缓慢冲洗载玻片,将多余染液洗去;
4. 载玻片晾干后显微镜下观察。
此法我们常用于小鼠肺泡灌洗液涂片的染色,其他标本可以根据染色结果适当调整染色时间。
显微镜下细胞的辨别:
红细胞:平均直径7μm,细胞呈粉红至红色,中央因双凹圆盘结构而呈现空白。
单核细胞:胞体圆至椭圆形,直径12-20μm,胞浆灰蓝色且稍有粗糙感,半透明似毛玻璃,胞质中常有小空泡。成熟的单核细胞胞核呈肾形、马蹄形、不规则形等,细胞核常有扭曲和折叠感。
淋巴细胞:分大(直径12-15μm)、小(直径6-9μm)两大类,圆形或椭圆形,胞质淡蓝色透明,无颗粒或偶有数颗紫红色的嗜天青颗粒。核圆形,直径接近细胞直径80%,染色质呈浓集的团块状。
中性粒细胞:胞体圆形至椭圆形,直径10-15μm。胞质呈无色或极浅的淡粉红色,弥散分布许多浅红或浅紫的细小颗粒。细胞核形态多样,可呈长杆状,也可为分叶状核,2-5叶不等,叶与叶间有细丝相连。
嗜酸性粒细胞:细胞直径13-15μm,胞浆中充满嗜酸性颗粒,颗粒粗大整齐,排列均匀紧密,为砖或鲜红色。在染色较深的涂片中,颗粒呈现深橙、棕至咖啡色。细胞核分叶,多为两叶呈眼镜状,颜色为深紫色,偶见3叶。
文章出自:瑞氏-吉姆萨染色实验 想了解更多请关注:http://www.vv-gene.com/
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