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尼氏染色法操作步骤：
1.固定：可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。
2.组织切片：石蜡切片7~10μm或25μm(见注意事项4)。
3.切片脱蜡入水。
4.用甲基紫染色液涂片，染色10~20min。
5.蒸馏水冲洗。
6.用NisslDifferentiation分化4~8s，直到大部分染色被消除。
7.直接经无水乙醇至二甲苯，显微镜下观察。
8.如果有必要，重复步骤6和7。重复时，给予少量NissolDifferentiation分化。
9.在二甲苯中充分冲洗。加拿大香脂或DPX封片。
尼氏染色法注意事项：
1.尼氏体离体后容易溶解，所以组织取出后应立即固定，否则难以着色。
2.组织固定起着非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。
3.本染色液对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。
4.如果要证实尼氏物质的存在，那么染色后必须要用NissolDifferentiation分化。
5.石蜡切片厚度7～10μm或25μm(皮质神经元密度的评估要用25μm厚的切片)。
6.染色后的标本务必避光保存，否则容易褪色。
7.主要由甲基紫染色液、分化液等组成。尼氏物质呈紫黑蓝色,神经元呈淡紫蓝色,细胞核呈紫蓝色。
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