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一、番红固绿染色原理
番红固绿染色原理是一种组织学染色方法,常用于对组织切片中胶原纤维和肌纤维进行染色。该方法的原理是:组织切片首先经过甲醛等固定剂固定,然后使用番红(Ponceau S)染色,番红可染色蛋白质和胶原纤维,使它们变为粉红色。接下来再用酸性绿染色剂染色,酸性绿主要染色肌肉纤维,使它们呈绿色。经过两种染色后,胶原纤维和肌肉纤维就可以清晰地区分出来,呈现出不同的颜色,使组织结构更加明显。
二、实验步骤
1 脱蜡
1) 70 ℃烤片30 min;
2) 二甲苯(I)中脱蜡10 min;
3) 二甲苯(II)中脱蜡10 min;
4) 100%乙醇(I)中5 min洗去二甲苯;
5) 100%乙醇(II)中5 min洗去二甲苯;
2 水化
1) 95%乙醇中水化5 min;
2) 85%乙醇中水化5 min;
3) 75%乙醇中水化5 min;
4) 蒸馏水中水化待用;
3 染色
1) 番红染色1-2 h;
2) 流水稍洗;
3) 固绿染色1min 左右;
4 脱水#
1) 无水乙醇脱水5 min;
2) 无水乙醇脱水5 min;
5 透明
1) 二甲苯(I)透明5 min;
2) 二甲苯(II)再次透明5 min;
6 封片
在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶,盖上盖玻片封固。
7镜检
显微镜下观察拍照。
三、番红固绿染色要注意什么
番红固绿染色是一种较为简单的染色方法,但在进行染色过程中,还是有一些需要注意的事项:
固定时间要适当:组织切片在进行染色前需要用固定剂进行固定,固定时间过长或过短都会影响染色效果。固定时间过长会导致细胞变性、胶原纤维变硬、失去染色能力,而固定时间过短会导致细胞和组织结构失去完整性,影响染色效果。
染色剂的使用量要合适:番红和酸性绿的使用量要根据组织切片的大小适当调整,过多或过少都会影响染色效果。通常情况下,每次使用的染色剂量要比组织切片的体积多一些,以充分覆盖整个组织切片。
染色时间不能过长:番红固绿染色时间一般在10-20分钟之间,时间过长会导致颜色变深,影响观察效果。
染色后要彻底洗涤:染色后要用大量的蒸馏水和乙醇洗涤组织切片,去除多余染色剂,否则会影响观察效果。
染色后要及时封片:染色后的组织切片要尽快进行封片,以避免染色剂的挥发和蒸发,影响染色效果。
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