HE染色步骤： 

1、脱蜡，脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟，事先准备好盖玻片。

2、覆水，100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5分钟，自来水冲洗5分钟×3。

3.、苏木精染色5分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。 

4、5%乙酸分化1分钟，流水冲洗，用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色变浅了一些，成为蓝色。

5、返蓝：返蓝液，实验室没有，也可不用。

6、伊红染色1分钟，根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间，流水冲洗。

7、脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10秒，二甲苯1分钟，可以在通风橱自然晾干再封

片，约5分钟左右。

8、滴上中性树胶，封片，用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖完，避免中间有气泡。

he染色原理：

易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性（neutrophilia)。

构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。

而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。

所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。脱氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。