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原位杂交实验常见问题及解决方案
2024-09-11
背景着色过高:可能原因:探针浓度过高、杂交温度过高、杂交时间过长、非特异性结合等。解决方案:降低探针浓度、降低杂交温度、缩短杂交时间、使用封闭剂减少非特异性结合。信号弱或无信号:可能原因:探针质量不佳、杂交条件不合适、样品处理不当等。解决方案:检查探针的完整性和特异性、优化杂交条件、重新处理样品。探...
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细胞凋亡检测方法—TUNEL法
2024-09-10
一、贴壁细胞的TUNEL染色取待测的细胞爬片,用新鲜配制的×1PBS清洗,室温,3分钟×3用4%多聚甲醛固定,室温,25分钟。用新鲜配制的×1PBS清洗,室温,5分钟×2次。细胞爬片浸入0.2%TritonX-100(×1 PBS配制)溶液中,室温,5分钟。浸入新鲜配制的×1PBS中清洗,室温,5分钟× 2次。移去细胞爬片上多余的液体,滴加equilibr...
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荧光原位杂交技术-生物学重要技术
2024-09-09
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)技术是一种重要的分子生物学和细胞遗传学技术。原理:基于碱基互补配对原则,用荧光标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交。探针类型:1. 染色体特异性重复序列探针:用于检测染色体的数目和结构异常。2. 全染色体或染色体区域特异性探针:可识别整条染色体...
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石蜡切片免疫荧光|操作步骤
2024-09-08
实验步骤:1、插入拨片架上放入60-65℃C的烤箱中,烤片1-1.5小时。2、脱蜡水化:二甲苯1,10min→二甲苯2,10min→二甲苯35min→无水乙醇1,5min一无水乙醇2,5min→95%乙醇5min→85%乙醇,5min→蒸馏水清洗。3、抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电,间隔 1...
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间充质干细胞成软骨诱导之阿利新蓝染色
2024-09-07
引言在干细胞研究领域,间充质干细胞°(MSCs)因其多向分化潜能而备受关注。其中,间充质干细胞向软骨细胞的分化是再生医学领域的一个重要研究方向,也是目前鉴定的必选项。为了准确鉴定间充质干细胞是否成功分化为软骨细胞,科研人员常常采用阿利新蓝染色技术。本文将详细介绍这一技术的由来、科学原理优缺点以及可能的替代...
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甲苯胺蓝染色的操作步骤
2024-09-06
甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种属于醌亚胺染料类,是碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。1、脱蜡至水:使用二甲苯Ⅰ浸泡5分钟,二甲苯Ⅱ浸泡5分钟,二甲苯Ⅲ浸...
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